为探讨四指马鲅幼鱼(Eleutheronema tetradactylum)在不同水温条件下耗氧率和窒息点的变化规律,试验比较了不同温度(22、27、32 ℃)对平均全长(4.5±0.5)cm、平均体质量(1.5±0.5)g四指马鲅幼鱼耗氧的影响。试验结果表明:1)在本试验条件下,水体温度越高,幼鱼全部死亡的时间越短,水体中所含溶解氧(DO)的质量浓度越高,22 ℃窒息点为1.39 mg/L,27 ℃窒息点为1.54 mg/L,32 ℃窒息点为1.76 mg/L;2)各温度组中幼鱼的耗氧率随试验时间的延长呈下降趋势,且温度越高,其耗氧率下降速度越快,当耗氧率从试验之初的1.418、2.346、4.243 mg/(g·h) 下降到0.4~0.5 mg/(g·h) 时,幼鱼全部死亡,不同温度组变化减慢,相邻观测时间点浓度差异不显著(P>0.05),对照组幼鱼存活率为100%;3) 试验过程中,当22、27、32 ℃温度组的DO含量分别为2.53、2.90、3.10 mg/L时,幼鱼开始出现乱窜、焦躁不安、偶尔跃出水面以及咧鳃等现象,随着试验持续进行,幼鱼跃出水面的频次增加,鳃盖振动幅度随之增加;其剧烈应激后静卧于水底、咧鳃、抽搐,然后窒息死亡。

为探究急性低氧胁迫对四指马鲅(Eleutheronema tetradactylum)幼鱼鳃器官的影响以及肝脏组织损伤情况,对四指马鲅进行了水体溶解氧为2 mg/L、时间为120 min的急性低氧胁迫试验,采用常规石蜡切片和 HE 染色以及电子显微技术,观察四指马鲅的鳃和肝脏器官。结果显示,在急性低氧胁迫下,四指马鲅鳃丝内血窦收缩、末端膨大,鳃小片长度变长、间隔变大,部分上皮细胞肿胀凸起;线粒体丰富细胞的顶隐窝由内凹变为平整,胞内线粒体形态由椭圆形变为圆形;肝组织出现肝细胞坏死、肝细胞融合等现象。表明低氧胁迫对四指马鲅鳃和肝组织具有较大的影响,且120 min就会造成组织结构的损伤。

本实验运用组织学方法对四指马鲅（Eleutheronema tetradactylum）视网膜在不同光照周期下组织结构及细胞超微结构的变化进行研究，并对四指马鲅RH1(Rhodopsin)、LWS(Long wave sensitive opsin)、RH2(Rhodopsin-like)、SWS2(Short wave sensitive opsin 2)视蛋白基因序列和氨基酸序列进行生物信息学分析，同时运用荧光定量PCR研究其在不同光照周期下表达量的变化，为该鱼种苗生产和养殖技术提供参考。实验设置昼夜比0 h : 24 h及24 h : 0 h两个实验组和12 h : 12 h对照组，在光照强度为(500±100) lux、水温25 ℃、盐度5的条件下养殖60 d，并在第30天和第60天时摘取视网膜做组织学切片、超薄切片和荧光定量PCR。显微结构显示：在不同光周期下，四指马鲅视网膜的结构完整、无明显异常。超微结构显示：在12 h : 12 h下，视锥和视杆的外节和内节均结构完整且排列整齐。在0 h : 24 h下，视锥和视杆外节膜盘结构较为完整，但排列较混乱，内节未见明显异常。但在24 h : 0 h下，视锥和视杆的外节膜盘结构受一定程度的损伤。生物信息学分析结果显示：RH1、LWS、RH2、SWS2视蛋白的开放阅读框分别包含1059 bp、1074 bp、1059 bp、1056 bp，分别编码352、357、352、351个氨基酸，且均具有7 tm跨膜结构域，氨基酸位点分别为54~306，57~319，62~314，60~312。荧光定量PCR结果显示：在第30天时，四种视蛋白在24 h : 0h的表达量显著高于0 h : 24 h和12 h : 12 h的表达量。视蛋白表达量在持续的光照条件下显著增加，是机体对周围光环境的一种适应性变化。随着饲养时间的延长，从总体趋势看，RH1、RH2、SWS2和LWS的表达量在0 h : 24 h和12 h : 12 h条件下增加，而在连续光照条件下，其表达量反而是降低的。而表达量的降低有可能是机体为了维持正常的昼夜节律而做出的一种代偿性的减少。因此，在实际育苗生产过程中，应避免入射光对四指马鲅的长时间照射。